دوره 13، شماره 2 - ( 1389 )                   جلد 13 شماره 2 صفحات 33-42 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Falahi S, Ravanshad M, Kenar Koohi A. Development of a new- fast and sensitive one step/one tube nested RT-PCR method in a closed system by double-joint primer for detecting HCV. MJMS. 2010; 13 (2) :33-42
URL: http://journals.modares.ac.ir/article-30-5154-fa.html
فلاحی شهاب، روانشاد مهرداد، کنارکوهی عذرا. راه‏اندازی یک روش جدید سریع و حساس Nested PCR یک مرحله‏ای-یک لوله‏ای در سیستم بسته با استفاده از دو آغازگر متصل به هم برای تشخیص ویروس HCV. پژوهش‌های آسیب‌شناسی زیستی. 1389; 13 (2) :33-42

URL: http://journals.modares.ac.ir/article-30-5154-fa.html


1- دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه ویروس‏شناسی پزشکی، کمیته تحقیقات دانشجویی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
2- استادیار، گروه ویروس‏شناسی پزشکی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
چکیده:   (2617 مشاهده)
هدف: واکنش زنجیر پلیمراز یکی از مهم‏ترین پیشرفت‏ها در زمینه زیست‏شناسی و تشخیص مولکولی است. با وجود سادگی در مفهوم این روش نیازمند کنش‏های پیچیده بین توالی هدف، آغازگرها، dNTP و آنزیم پلیمراز به‏منظور تکثیر و تشخیص موفق است. شناسایی ویروس‏های RNA دار نیازمند استفاده از روش‏هایی با حساسیت و ویژگی بالا است، بنابراین تکثیر براساس روش Nested PCR تا حدی منجر به بهبود حساسیت شده و از سوی دیگر، یک مرحله‏ای کردن روش مذکور باعث کاهش آلودگی‏های احتمالی خواهد شد. هدف از مطالعه حاضر راه‏اندازی و به‏کارگیری روش جدید، سریع و حساس Nested PCR یک مرحله‏ای- یک لوله‏ای در سیستم بسته با استفاده از دو آغازگر به هم چسبیده است. مواد و روش‏ها: در این مطالعه، روش جدید و ویژه‏ای از طراحی آغازگر به‏منظور یک مرحله‏ای- یک لوله‏ای کردن واکنش استفاده شد. روش طراحی شده پس از راه‏اندازی و بهینه‏سازی، روی نمونه‏های کنترل مثبت و منفی ارزیابی شد. نتایج: روش راه‏اندازی شده، روی50 نمونه مثبت ویروس هپاتیت C، 10 کنترل منفی ژنوم انسانی و 5 نمونه از هرکدام از ویروس‏های هپاتیت B، نقص ایمنی اکتسابی انسان، هپاتیت G و تورکوتنو انجام گردید. براساس نتایج به‏دست آمده از مجموع آزمایشات میزان حساسیت و ویژگی روش طراحی شده، محاسبه شد. در 48 مورد از 50 نمونه مثبت باند مورد انتظار مشاهده گردید و در هیچ‏یک از نمونه‏های کنترل منفی باندی مشاهده نشد. نتیجه‏گیری: براساس سیستم ویژه طراحی آغازگر که در مطالعه حاضر استفاده شد، آغازگرهای داخلی به‏صورت مکمل حالت معمول PCR و چسبیده به آغازگرهای خارجی ساخته می‏شوند. احتمال اتصال آغازگرهای خارجی و داخلی به الگوهای نادرست در هر دو دور واکنش غیرممکن می‏شود و در نتیجه باندهای غیراختصاصی تولید نخواهد شد. برتری دیگر روش طراحی شده عدم وجود آلودگی به دلیل یک مرحله‏ای شدن و علاوه بر آن؛ کوتاه‏تر شدن زمان واکنش و نیز کاهش هزینه‏ها است.
متن کامل [PDF 948 kb]   (2110 دریافت)    

دریافت: ۱۳۸۸/۹/۸ | پذیرش: ۱۳۸۸/۱۲/۱۷ | انتشار: ۱۳۸۹/۴/۱۶

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA code