جلد 10 - Summer 2008-                   جلد 10 - Summer 2008- صفحات 35-41 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Shahzamani K, Sabahi F, Merat S, Rezvan H, Mirab Samiee S, Karimi Arzanani M et al . The use of a sensitive RT-Nested PCR method for detection of Hepatitis C virus. MJMS. 2008; 10 :35-41
URL: http://journals.modares.ac.ir/article-30-9015-fa.html
شاهزمانی کیانا، صباحی فرزانه، مرات شاهین، رضوان حوری، میراب سمیعی سیامک، کریمی ارزنانی محسن و همکاران.. به‌کارگیری یک روش حساسRT-Nested PCR برای تشخیص ویروس هپاتیت C. پژوهش‌های آسیب‌شناسی زیستی. 1386; 10 () :35-41

URL: http://journals.modares.ac.ir/article-30-9015-fa.html


1- گروه ویروس‌شناسی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
2- گروه ویروس شناسی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
3- مرکز تحقیقات گوارش و کبد، بیمارستان شریعتی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران
4- مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران، تهران، ایران
5- آزمایشگاه‌های تحقیقاتی کنترل غذا و دارو، تهران، ایران
6- گروه ژنتیک، دانشگاه کارولینسکا، سوئد
7- آزمایشگاه تخصصی بیمارستان دی، تهران، ایران
چکیده:   (2803 مشاهده)
هدف: ویروس هپاتیت Cیکی از مهمترین عوامل ایجاد کننده هپاتیت ویروسی به شمار می‌رود و تشخیص آن در نمونه‌های مشکوک از اهمیت بالایی برخوردار است. خطر انتقال عفونت ویروسی از طریق تزریق خون و فرآورده‌های آن ناشی از نقص روش‌های غربالگری سرولوژیک در تشخیص اهداکنندگان آلوده‌ای است که در دوره پنجره بیماری هستند. بنابراین تشخیص دقیق و به‌موقع عفونت HCVپیش از ظهور آنتی‌بادی در بدن فرد آلوده از اهمیت ویژه‌ای برخوردار است. تشخیص ژنوم ویروس HCV در نمونه‌های مشکوک، از گسترش بیماری و شیوع روزافزون آن جلوگیری خواهد نمود. با استفاده از این روش که مبتنی بر شناسایی اسید نوکلئیک ویروس است، می‌توان عفونت را در مراحل ابتدایی و قبل از ظهور آنتی‌بادی‌های اختصاصی تشخیص داد. هدف از این پژوهش طراحی روش بسیار حساس و دقیق RT-Nested PCR‌ برای تشخیص عفونت HCV است. مواد و روش‌ها: روش RT-Nested PCR به‌منظور جداسازی توالی حفاظت شده از ناحیه 5' UTR راه‌اندازی و به کار برده شد. ابتدا با استفاده از روش ترانس کریپتاز معکوس، سنتز cDNA از روی RNAژنوم ویروس صورت گرفت. پس از آن با روش Nested PCR با استفاده دو جفت آغازگر اختصاصی و طی دو مرحله، قطعه مورد نظر تکثیر شد. محـصولات PCR‌ به کـمک روش الـکتروفورز بررسی و همچنین از کیت تجاری RT-PCR یک مرحله‌ای برای مقایسه با نتایج حاصل از روش طراحی شده استفاده شد. نتایج: تعداد 25 نمونه پلاسمای بیماران HCV مثبت که توسط روش‌های الایزا و وسترن بلات مثبت قطعی تشخیص داده شده بودند به‌عنوان نمونه‌های مثبت، رقت های مختلف از یک نمونه بیمار با تیتر بالا به‌عنوان استاندارد و 25 نمونه پلاسمای منفی متعلق به اهداکنندگان خون سالم به‌عنوان کنترل منفی جمع‌آوری شده با این روش بررسی شد. در تمام موارد مثبت، باند مورد نظر روی ژل آگارز مشاهده شد. با توجه به این که در هیچ‌یک از نمونه‌های منفی باند مزبور ملاحظه نشد، مقایسه نتایج حاصل از روش طراحی شده با روش تجاری موجود همبستگی خوبی را نشان داد. نتیجه‌گیری: بر اساس نتایج به دست آمده در این مطالعه، مشخص شد که روش راه‌اندازی شده در تشخیص عفونت HCV‌ از حساسیت و اختصاصیت بالایی برخوردار است. همچنین با توجه به حساسیت این روش، به‌نظر می‌رسد که می‌توان ژنوم ویروس را پیش از تغییرات سرمی و ظهور آنتی‌بادی‌ها تشخیص داد و از این رو می‌توان دوره پنجره را کوتاه‌تر نمود.
متن کامل [PDF 460 kb]   (2250 دریافت)    

دریافت: ۱۳۸۶/۶/۶ | پذیرش: ۱۳۸۶/۶/۶ | انتشار: ۱۳۸۶/۶/۶

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA code