Pathobiology Research
Pathobiology Research
mjms
Medical Sciences
http://mjms.modares.ac.ir
1
admin
2538-3000
2538-5887
en
jalali
1391
11
1
gregorian
2013
2
1
15
4
online
1
fulltext
fa
جداسازی، تکثیر و غنیسازی سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی موش نوزاد در روش همکشتی با سلولهای سرتولی اتولوگ
Isolation, Expansion and Purification of Mouse Spermatogonial Stem Cells in an Autologous Sertoli Cell Co-culture System
هدف: ارایه یک روش ساده برای جداسازی، تکثیر و غنی‏سازی سلول‏های بنیادی اسپرماتوگونی موش نوزاد مواد و روش‏ها: سوسپانسیون سلولی حاوی سلول‏های اسپرماتوگونی و سرتولی با استفاده از هضم آنزیمی از بیضه موش نوزاد دو روزه جداسازی شد. سلول‏ها به صورت هم‏کشتی و در محیط کشت DMEM/F12 حاوی 10 درصد سرم به مدت دو هفته کشت داده شدند. ماهیت سلول‏های سرتولی و اسپرماتوگونی به ترتیب توسط بیان پروتئین‏های ویمنتین وPLZF تأیید شد. برای ارزیابی میزان تکثیر سلول‏های بنیادی اسپرماتوگونی تعداد کلونی‏های تشکیل شده و مساحت آن‏ها در طول دو هفته کشت اندازه‏گیری شد. در پایان هفته دوم، بیان ژن‏های اختصاصی سلول‏های اسپرماتوگونی (Stra8، Piwill2، DAZL، Mvh) ارزیابی شد. نتایج: نتایج به‏دست آمده نشان داد که سلول‏های اسپرماتوگونی و سرتولی جدا شده نشانگرهای اختصاصی این سلول‏ها را بیان می‏کنند. در طی دوره کشت، بین چهار نقطه زمانى اختلاف معنی‏داری در تعداد و مساحت کلونی‏های سلول‏های بنیادی اسپرماتوگونی دیده شد (05/0Pنتیجه‏گیری: مطالعه حاضر نشان داد که هم‏کشتی سلول‏های اسپرماتوگونی و سلول‏های سرتولی با منبع یکسان محیط رشد مناسب و بهینه‏ای را فراهم می‏کند که بدون اضافه کردن عوامل رشد خارجی و دستکاری‏های شیمیایی می‏توان از آن برای تکثیر سلول‏های بنیادی اسپرماتوگونی استفاده کرد.
Objective: This study presents a simple method for isolation, expansion and purification of neonatal mouse spermatogonial stem cells. Methods: We used enzymatic digestion to isolate a cell suspension of spermatogonia and Sertoli cells from neonatal 2-day-old mice. The cells were cultured in DMEM/F12 that contained 10% serum for two weeks. Sertoli and spermatogonia cell characteristics were confirmed by examining for the presence of vimentin and PLZF proteins, respectively. To assess the rate of spermatogonia stem cell expansion, the area and number of colonies were measured during the two weeks of culture. At the end of the second week, we detected spermatogonia cell-specific expressions of the <em>Stra8, Piwill2, DAZL</em>, and <em>Mvh</em> genes. Results: Current results indicated that isolated Sertoli and spermatogonia cells were immunopositive for specific markers. During the culture period, a significant difference was seen in the number and area of spermatogonial stem cell colonies (PConclusion: Our study showed that co-culture of spermatogonia and Sertoli cells from same source provides a convenient and efficient environment. This co-culture, without the addition of external growth factors and chemical manipulations, can be used for proliferation of spermatogonia stem cells.
سلولهای بنیادی,اسپرماتوگونی,همکشتی,کلونیزایی
Co-culture,Colonization,Spermatogonia,Stem cell
21
33
http://mjms.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-30-1000-7881&slc_lang=fa&sid=30
Setareh
Javanmardi
ستاره
جوانمردی
100319475328460067002
100319475328460067002
No
Ph.D. Candidate, Department of Anatomy, Faculty of Medicine, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran
دانشجوی دکتری تخصصی، گروه علوم تشریح، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه اله، تهران، ایران
Mohammad Hossein
Asadi
محمد حسین
اسدی
100319475328460067003
100319475328460067003
Yes
Professor, Department of Anatomy, Faculty of Medicine, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran
دانشیار، گروه علوم تشریح، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه اله، تهران، ایران
Mansoureh
Movahedin
منصوره
موحدین
100319475328460067004
100319475328460067004
No
Professor, Department of Anatomy, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
استاد، گروه علوم تشریح، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران