Pathobiology Research
Pathobiology Research
mjms
Medical Sciences
http://mjms.modares.ac.ir
1
admin
2538-3000
2538-5887
en
jalali
1388
7
1
gregorian
2009
10
1
11
پاییز و زمستان 87-
online
1
fulltext
fa
کلونینگ و توالی یابی ژن GRA7 (Granular Antigen7)
توکسوپلاسما گونده ای
Cloning and sequencing of granular antigen7 (GRA7) in TOPO vector and transformation in TOP10
هدف: توکسوپلاسما گونده ای تک یاخته ای داخل سلولی و عامل ایجاد توکسوپلاسموزیس بوده و دارای انتشار جهانی است. در سال های اخیر پیشرفت هایی در زمینه تهیه واکسن صورت گرفته که منجر به ایجاد پاسخ های محافظت کننده شده است. آنتی ژن GRA7 با وزن مولکولی 29 کیلودالتون یک آنتی ژن ترشحی گرانولی فشرده است که به وسیله سلول های آلوده میزبان آزاد می شود. در سلول های آلوده به تاکی زوئیت، پروتئین 29 کیلو دالتونی در واکوئل پارازیتوفروز تجمع پیدا می کند. علاوه بر ایمونوژن بودن و کاندیدای تهیه واکسن در تشخیص نیز به کار می رود.
مواد و روش ها: برای این کار ابتدا DNA توکسوپلاسما گونده ای با روش فنل کلروفرم استخراج شده سپس با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن GRA7 این قطعه با استفاده PCR تکثیر و در ناقل TOPO کلون شد. پلاسمید کلون شده در باکتری TOP10 ترانسفورم شد. با استفاده از PCR، هضم آنزیمی و توالی یابی کلون مورد نظر تأیید شد.
نتایج: تعیین توالی ژن GRA7 کلون شده در پلاسمید TOPO نشان داد که قطعه ای 749 جفت بازی در این پلاسمید کلون شده است و با سویه RH موجود در بانک ژنی ازنظر توالی نوکلئوتیدی فقط در یک باز تفاوت داشت.
نتیجه گیری: نتایج به دست آمده نشان می دهد که کلون به دست آمده برای ساب کلون کردن در پلاسمیدهای بیانی یوکاریوتی و پروکاریوتی مناسب است.
Objective: Toxoplasmosis, caused by an intracellular protozoan parasite, and the Toxoplasma gondii, is widespread throughout the world. In recent years, significant progress has been made in the identification of vaccine candidates which could induce a protective response.
GRA7, an excretory 29 kDa Toxoplasma gondii a dense granular antigen released by infected host cells. In tachyzoite-infected cells, p29 accumulates within the parasitophorous vacuole and co-localizes with its delimiting membrane.
Materials and Methods: In the present work, first genomic DNA of Toxoplasma gondii was extracted and used for amplifying of GRA7 gene as a template. Then PCR product was extracted from agarose gel and cloned into TOPO vector. The plasmid containing GRA7 gene was extracted from the transformed bacteria (TOP10 strain) and sequenced.
Results: Sequence analysis of GRA7 gene cloned into TOPO vector showed only one base difference when composed with the gene bank sequence for RH strain was only one base.
Conclusion: The results indicated that this clone is suitable for subcloning in Prokaryotic and Eukaryotic plasmid.
کلونینگ,توکسوپلاسما گونده ای,ژن GRA7,توالی یابی
Toxoplasma gondii,Cloning,Sequencing,GRA7 gene
73
80
http://mjms.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1000-8584&slc_lang=fa&sid=30
Fatemeh
Ghaffarifar
فاطمه
غفاری فر
100319475328460066716
100319475328460066716
Yes
Associated Professor, Department of Parasitology, School of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
دانشیار، گروه انگل شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
Rahme
Nordin
رحمه
نوردین
100319475328460066717
100319475328460066717
No
Professor, Research Center of Molecular Medicine, USM University, Penang, Malaysia
استاد، مرکز تحقیقات پزشکی مولکولی، دانشگاه USM، پنانگ، مالزی
Zohreh
Sharifi
زهره
شریفی
100319475328460066731
100319475328460066731
No
Assistant Professor, Research Center of Virology, Iranian Blood Transfusion Organization, Tehran, Iran
استادیار، مرکز تحقیقات ویروس شناسی، سازمان انتقال خون ایران، تهران، ایران
Abdolhossein
Dalimi
عبدالحسین
دلیمی
100319475328460066718
100319475328460066718
No
Professor, Department of Parasitology, School of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
استاد، گروه انگل شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
Shahla
Roudbar Mohammadi
شهلا
رودبار محمدی
100319475328460066719
100319475328460066719
No
Assistant Professor, Department of Mycology, School of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
استادیار، گروه قارچ شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
Sakineh
Ghasemi Nikoo
سکینه
قاسمی نیکو
100319475328460069083
100319475328460069083
No
M.Sc., Department of Parasitology, School of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
کارشناس ارشد، گروه انگل شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران