Pathobiology Research
Pathobiology Research
mjms
Medical Sciences
http://mjms.modares.ac.ir
1
admin
2538-3000
2538-5887
en
jalali
1390
12
1
gregorian
2012
3
1
14
4
online
1
fulltext
fa
کلون، بیان و تخلیص مایکولیل ترانسفراز C مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در میزبان پروکاریوتی
Cloning, Expression and Purification of Mycolyltransferase C of Mycobacterium tuberculosis in prokaryotic host
هدف: کمپلکس آنتیژن 85 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس شامل سه پروتئین ترشحی است که خاصیت ایمنیزایی دارند. این پروتئینها کاندیداهای مهمی در طراحی واکسن سل هستند. برای استفاده از این پروتئینها بهعنوان واکسنهای زیرواحدی یا بهعنوان یادآور برای BCG نوترکیب یا واکسنهای DNA، تولید آنتیژنهای پروتئینی به شکل نوترکیب الزامی است. پروتئینهای مایکوباکتریوم که در دیواره هستند نسبتاً غیرقطبی است و تولید آنها به شکل نوترکیب در سویه بیانی اشریشیا کلی با پروتئینهای دیگر متفاوت است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص آنتیژن نوترکیب 85C بهعنوان یک ایمنوژن است.
مواد و روشها: آنتیژن 85C در حامل پلاسمیدی pJET1.2 و در نهایت در pET32a(+) کلون و در هر دو پلاسمید تعیین توالی شد. القای تولید پروتئین با IPTG صورت گرفت و تخلیص با حل کردن اجسام تودهای داخل سلولی در اوره، جذب با رزین نیکل، حذف اوره با شیب کاهشی اوره در محلولهای شستشو و در نهایت جمعآوری پروتئین نوترکیب به شکل محلول انجام شد. تأیید آنتیژنیک پروتئین نوترکیب با وسترن بلات و توسط آنتیبادی ضد پلیهیستیدین، آنتی سرم پلیکلونال خرگوشی ضد مایکوباکتریوم توبرکولوزیس و سرم بیمار سلی بستری انجام شد.
نتایج: ژن آنتیژن 85C با موفقیت کلون و با تعیین توالی تأیید شد. آنتیژن 85C در میزبان اشریشیا کلی بیان و تخلیص شد.
نتیجهگیری: نتایج وسترن بلات به موازات نتایج تعیین توالی نشان دهنده درستی تولید پروتئین آنتیژن 85C نوترکیب و حفظ نسبی ساختار اپیتوپی آن است.
Objective: Antigen 85 complex of Mycobacterium tuberculosis includes three immunogenic proteins which are important TB vaccine candidates. The use of these protein as a component of subunit vaccines, as a part of DNA vaccines or recombinant BCG boosters, enhances their recombinant production. Recombinant production of these mycobacterial proteins located in the cell wall somehow differs from the other proteins, as they are partially apolar. Therefore, this study aims to produce recombinant Ag85C as a vaccine candidate.
Methods: Ag85C gene was cloned in pJET1.2 and subsequently in pET32a(+). Both recombinant plasmids were sequenced. Expression of the recombinant protein was induced with 1mM IPTG. Recombinant Ag85C was purified through dissolving the inclusions in 8M urea buffer, absorbed to Ni-NTA resins, washed by buffers with decreasing urea concentrations, and finally eluted in aqueous solution. Western blot analysis was performed using anti-6His tag antibody, rabbit anti-M. tuberculosis polyclonal antibody, and the serum from hospitalized TB patients.
Results: Ag85C successfully cloned in both plasmid vectors. The recombinant Ag85C expressed in the E. coli host and was purified with significant yield.
Conclusion: Western blot results along with that of sequencing ensure accurate production of recombinant Ag85C, retaining its partial epitopes
مایکوباکتریوم توبرکلوزیس,کمپلکس آنتیژن 85,آنتیژن 85C واکسن سل
Ag85 complex,Ag85C,TB vaccine,Mycobacterium tuberculosis
1
12
http://mjms.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-30-1000-9149&slc_lang=fa&sid=30
Haniyeh
Aghababa
هانیه
آقابابا
100319475328460066840
100319475328460066840
No
Department of Bacteriology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه باکتری‏شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
Ashraf
Mohabbati Mobarez
اشرف
محبتی مبارز
100319475328460066856
100319475328460066856
Yes
Department of Bacteriology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه باکتری شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
Mehrdad
Behmanesh
مهرداد
بهمنش
100319475328460066841
100319475328460066841
No
Department of Genetics, Faculty of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه ژنتیک، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
Nima
Khoramabadi
نیما
خرم آبادی
100319475328460066842
100319475328460066842
No
Department of Bacteriology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه باکتری‏شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
Mehdi
Nejati
مهدی
نجاتی
100319475328460068922
100319475328460068922
No
Head Department of Bacterial Vaccines, Production and Research Complex, Pasteur Institute of Iran, Alborz, Iran
سرپرست بخش واکسن‏های باکتریایی، مجتمع تولیدی و تحقیقاتی انستیتو پاستور، انستیتو پاستور ایران، البرز، ایران