Pathobiology Research
Pathobiology Research
mjms
Medical Sciences
http://mjms.modares.ac.ir
1
admin
2538-3000
2538-5887
en
jalali
1395
8
1
gregorian
2016
11
1
19
3
online
1
fulltext
fa
بررسی اثر کامفور بر بیان ژنهای INT1 و EFG1 در کاندیدا آلبیکنس در سه زمان تیمار 24، 48 و 72 ساعت با روش Real Time PCR
A Survey of the Effect of Camphor on INT1 and EFG1 Gene Expressions of Candida albicans at Three Treatment Times (24, 48, and 72 hours) via Real-time PCR
<strong><span lang="FA">هدف:</span></strong><span lang="AR-SA">کاندیدا آلبیکنس مخمر فرصت طلبی است که در افراد دارای نقص سیستم ایمنی و در شرایط مناسب، به حالت بیماری‏زا مبدل می‏شود. مواد تشکیل دهنده گیاهان دارویی مانند کامفور می‏توانند بیان ژن‏</span><span lang="FA">های دخیل در ویرولانس</span><span lang="AR-SA"> قارچ‏ها را به واسطه خواص ضد قارچی خود، کاهش دهند. </span><span lang="FA">محصول </span><span lang="AR-SA">ژن‏های </span><em><span dir="LTR">INT1</span></em><span lang="FA"> و </span><em><span dir="LTR">EFG1</span></em><span lang="AR-SA"> نقش مهمی در چسبندگی کاندیداآلبیکنس به بافت میزبان و هیفی شدن آن ایفا می‏کنند که این خصوصیات می‏تواند از عوامل بسیار مهم </span><span lang="FA">بیماریزایی</span><span lang="AR-SA">آن ‏باشند. مطالعه حاضر به بررسی اثر کافور بر تغییرات بیان ژن‏های </span><em><span dir="LTR">INT1</span></em><span lang="FA"> و </span><em><span dir="LTR">EFG1</span></em><span> <span lang="AR-SA">در سه زمان تیمار 24، 48 و 72 ساعت با استفاده از </span></span><span dir="LTR">RealtimePCR</span><span lang="FA">پرداخته</span><span lang="AR-SA"> است.</span>
<strong><span lang="FA">مواد و روش</span></strong><strong><span lang="AR-SA">‏</span></strong><strong><span lang="FA">ها</span></strong><span lang="FA">: رقت</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">های سریالی از کامفور در غلظت</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">های 512، 256، 128، 64، 32، 16، 8، 4، 2 و 1 میلی</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">گرم در هر میلی</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">لیتر تهیه شد و سپس سوسپانسیون سلولی کاندیدا آلبیکنسسویه </span><span dir="LTR">ATCC 10231</span><span lang="FA">با غلظت 10<sup>3</sup>×5/1 سلول در میلی</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">لیتر به</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">مدت 48 ساعت در 35 درجه سانتی</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">گراد با آن تیمار شد. سپس حداقل غلظت مهارکننده 50 درصد و 90 درصد (</span><span dir="LTR">MIC50/90</span><span lang="FA">) رشد قارچ و حداقل غلظت کشنده قارچ (</span><span dir="LTR">MFC</span><span lang="FA">) این ترکیب به روش رقت میکروبراث تعیین شد. کاندیدا آلبیکنس به</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">مدت 24، 48 و 72 ساعت با کامفور در حداقل غلظت مهارکننده 50 درصد رشد قارچ (</span><span dir="LTR">MIC50</span><span lang="FA">) تیمار شد. استخراج </span><span dir="LTR">RNA</span><span lang="FA"> مخمرها قبل و بعد از مجاورت با این ترکیب صورت گرفت، سپس ترجمه معکوس به </span><span dir="LTR">cDNA</span><span> <span lang="FA">و در نهایت ارزیابی به کمک </span></span><span dir="LTR">Real time PCR</span><span lang="FA"> انجام شد.</span>
<strong><span lang="FA">نتایج</span></strong><span lang="FA">: حداقل غلظت مهارکننده 50 درصد رشد قارچ (</span><span dir="LTR">MIC50</span><span lang="FA">)، حداقل غلظت مهارکننده 90 درصد رشد قارچ </span><span><span lang="FA">(</span></span><span dir="LTR">MIC90</span><span lang="FA">) و حداقل غلظت کشنده قارچ (</span><span dir="LTR">MFC</span><span lang="FA">) برای کامفور به ترتیب 16، 32 و 64 میلی</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">گرم در هر میلی</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">لیتر تعیین شد. بررسی تغییرات بیان این ژن</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">ها در مخمر نیز نشان داد که کامفور بیان ژن </span><em><span dir="LTR">INT1</span></em><span lang="FA"> را در زمان 24 ساعت پس از تیمار به میزان 87 درصد، 48 ساعت پس از تیمار 97 درصد و 72 ساعت پس از تیمار 86 درصد نسبت به نمونه تیمار نشده کاهش داده است. این موضوع در خصوص ژن </span><em><span dir="LTR">EFG1</span></em><span lang="FA"> نیز نشان داد که بیان این ژن در تیمارهای 24 ساعتی با کامفور به میزان 58 درصد، در تیمارهای 48 ساعتی 93 درصد و در تیمارهای 72 ساعتی 49 درصد کاهش داشته است.</span>
<strong><span lang="FA">نتیجه</span></strong><strong><span lang="AR-SA">‏</span></strong><strong><span lang="FA">گیری</span></strong><span lang="FA">: در سال</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">های اخیر به دنبال بروز مقاومت</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">های دارویی و بروز عوارض جانبی داروهای شیمیایی، استفاده از گیاهان دارویی افزایش یافته است. این گیاهان ممکن است بتوانند به</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">عنوان عوامل ضد قارچی کارآمد عمل نمایند. نتایج این پژوهش نشان داد که استفاده از ترکیبات خالص شیمیایی موجود در ساختار این گیاهان مانند کامفور، می</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">تواند به</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">طور چشمگیری در کاهش بیان ژن</span><span lang="AR-SA">‏</span><span lang="FA">های ویرولانس قارچی از جمله </span><em><span dir="LTR">INT1</span></em><span lang="FA"> و </span><em><span dir="LTR">EFG1</span></em><span lang="FA"> تأثیر داشته باشد.<span> </span></span>
<strong><span style="font-size: medium;">Objective: </span></strong><em><span style="font-size: medium;">Candida albicans (C. albicans) </span></em><span style="font-size: medium;">is an </span><span style="font-size: medium;">opportunistic yeast that can lead to pathogenesis in immunocompromised individuals and under suitable conditions. Medicinal plants ingredients such as camphor can reduce the expressions of genes involved in virulence of the fungi through their antifungal properties. The products of </span><em><span style="font-size: medium;">INT1</span></em><span style="font-size: medium;"> and </span><em><span style="font-size: medium;">EFG1</span></em><span style="font-size: medium;"> are implicated in inducing filamentous growth and adhesion of </span><em><span style="font-size: medium;">C. albicans</span></em><span style="font-size: medium;"> to the host tissues. Both of these characteristics are very important in its virulence</span><em><span style="font-size: medium;">. </span></em><span style="font-size: medium;">The present study focuses on the evaluation of the effects of camphor on </span><em><span style="font-size: medium;">INT1</span></em><span style="font-size: medium;"> and </span><em><span style="font-size: medium;">EFG1 </span></em><span style="font-size: medium;">expressions at three time points of treatment (24, 48, and 72 hours) via real-time PCR.</span>
<strong><span style="font-size: medium;">Methods</span></strong><span style="font-size: medium;">: We prepared serial dilutions of camphor (1, 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, and 512 mg/ml) and co-cultured them with 1.5×10</span><sup><span style="font-size: small;">3</span></sup><span style="font-size: medium;"> cells/ml of a </span><em><span style="font-size: medium;">C. albicans</span></em><span style="font-size: medium;"> ATCC 10231 suspension for 48 hours at 35</span><sup><span style="font-size: small;">0</span></sup><span style="font-size: medium;">C. Next, we determined the MIC50/90 and MFC. </span><em><span style="font-size: medium;">C. albicans</span></em><span style="font-size: medium;"> cells were treated with the MIC50 concentration of camphor for 24, 48, and 72 hours. RNA from </span><em><span style="font-size: medium;">C. albicans </span></em><span style="font-size: medium;">was extracted</span><span style="font-size: medium;">before and after treatment, back translated into cDNA, and analyzed with real-time PCR.</span>
<strong><span style="font-size: medium;">Results:</span></strong><span style="font-size: medium;">MIC50, MIC90 and MFC of camphor were determined at 16 mg/ml, 32 mg/ml and 64 mg/ml, respectively. </span><span style="font-size: medium;">Evaluation of gene expression changes in yeast </span><span style="font-size: medium;">showed that camphor reduced the </span><em><span style="font-size: medium;">INT1</span></em><span style="font-size: medium;"> gene</span><span style="font-size: medium;"> expression</span><span style="font-size: medium;"> about 87% at 24 hours, 97% at 48 hours, and 86% at 72 hours after treatment</span><span style="font-size: medium;"> compared to the untreated sample.</span><span style="font-size: medium;"> </span><em><span style="font-size: medium;">EFG1 </span></em><span style="font-size: medium;">expression reduced about 58% at 24 hours, 93% at 48 hours, and 49% at 72 hours after treatment with camphor.</span>
<strong><span style="font-size: medium;">Conclusion:</span></strong><span style="font-size: medium;"> In recent years, advancements have been seen in herbalism due to the increased drug resistance and adverse effects of chemical drugs.</span><span style="font-size: medium;"> These plants may efficiently act as antifungal agents.</span><span style="font-size: medium;"> The </span><span style="font-size: medium;">results of this study </span><span style="font-size: medium;">have shown that the </span><span style="font-size: medium;">use of camphor can significantly reduce the expression of virulence genes </span><em><span style="font-size: medium;">INT1 </span></em><span style="font-size: medium;">and </span><em><span style="font-size: medium;">EFG1 </span></em><span style="font-size: medium;">in </span><em><span style="font-size: medium;">C. albicans</span></em><span style="font-size: medium;">.</span>
کاندیدا آلبیکنس,کامفور,عوامل بیماریزا
Candida albicans,Camphor,Virulence factors
59
72
http://mjms.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-30-16628-1&slc_lang=fa&sid=30
Reza
Ghaffaripour
رضا
غفاری پور
100319475328460068196
100319475328460068196
No
Department of Medical Mycology, Faculty of Medicine, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه قارچ شناسی پزشکی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
Masoumeh
Rajabi Bazl
معصومه
رجبی بذل
100319475328460069074
100319475328460069074
No
Department of Clinical Biochemistry, Faculty of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran
گروه بیوشیمی بالینی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران
Mohammad Hossein
Yadegari
محمد حسین
یادگاری
100319475328460048910
100319475328460048910
Yes
Department of Medical Mycology, Faculty of Medicine, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه قارچ شناسی پزشکی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران