Pathobiology Research
Pathobiology Research
mjms
Medical Sciences
http://mjms.modares.ac.ir
1
admin
2538-3000
2538-5887
en
jalali
1392
9
1
gregorian
2013
12
1
16
3
online
1
fulltext
fa
شناسایی آلودگی مایکوپلاسما سالیواریوم در کشتهای سلولی با استفاده از روش PCR
Detection of Mycoplasma salivarium Contamination in Cell Culture using PCR Method
هدف: مایکوپلاسما سالیواریوم یکی از گونه‏های مایکوپلاسمای اصلی آلوده کننده کشت‏های سلولی محسوب می‏شود و می‏تواند آثار نامطلوبی را روی کشت‏های سلولی ایجاد کند؛ در نتیجه شناسایی این آلودگی و سرعت تشخیص آن، در کنترل و پیشگیری از این موضوع اهمیت دارد. هدف از این مطالعه شناسایی آلودگی مایکوپلاسما سالیواریوم در کشت‏های سلولی با استفاده از روش واکنش زنجیره پلیمرازی (PCR) بود.
مواد و روش‏ها: به منظور راه‏اندازی PCR از سویه استاندارد مایکوپلاسما سالیواریوم و آغازگرهای اختصاصی این گونه براساس تکثیر قطعه‏ای از ژن 16SrRNA استفاده شد و در ادامه حساسیت و ویژگی این آزمون تعیین شد. نمونه‏های مورد بررسی پس از استخراج DNA، از نظر آلودگی به جنس مایکوپلاسما و گونه سالیواریوم مورد آزمایش PCR قرار گرفتند.
نتایج: در این مطالعه تعداد 62 نمونه از کشت‏های سلولی ارسالی به آزمایشگاه مرجع مایکوپلاسما در مؤسسه رازی مورد بررسی قرار گرفتند که از این تعداد 42 (75/67 درصد) نمونه از نظر آلودگی به جنس مایکوپلاسما و از این تعداد 15 (72/35 درصد) نمونه با ایجاد باند در 434 جفت باز از نظر آلودگی به گونه مایکوپلاسما سالیواریوم مثبت بودند.
نتیجه‏گیری: با توجه به بالا بودن درصد آلودگی کشت‏های سلولی به مایکوپلاسما سالیواریوم، رعایت شرایط آسپتیک توسط پرسنل آزمایشگاه در مراحل آماده‏سازی و کار با کشت‏های سلولی توصیه می‏شود. ضمناً با بهره‏گیری از آغازگرهای مناسب و اختصاصی امکان شناسایی و تشخیص آلودگی به مایکوپلاسما سالیواریوم در آزمایشگاه‏های کشت سلولی، در کمتر از یک روز با استفاده از روش PCR امکان‏پذیر است.
Objective:<em> Mycoplasma salivarium (M. salivarium) </em>isone of the most common contaminants present in cell culture laboratories that cause undesirable effects on cell cultures. Thus, the identification and rapid diagnosis in controlling and prevention of this contaminant are important. The aim of this study is the detection of <em>Mycoplasma salivarium</em> contamination in cell culture using polymerase chain reaction (PCR) method.
Methods: A 16S rRNA-based Mycoplasma genus and specific primer PCR method for <em>M.</em><em> s</em><em>alivarium</em> was developed. The sensitivity and specificity of this method were determined. The PCR test was used after we extracted DNA from the cultured isolates.
Results: A total of 62 cell culture samples were sent to the Mycoplasma Reference Laboratory at Razi Institute, Karaj, Iran for detection of Mycoplasma contamination. A total of 42 (67.75%) out of 62 samples scored positive according to the Mycoplasma genus. From these 42 samples, 15 (35.72%) reacted positively with a clear band of 434 bp in the<em> M. Salivarium</em>-specific PCR method.
Conclusion: Due to the high percentage of <em>M. salivarium</em> contamination in cell cultures<em>,</em> we recommend aseptic conditions be used in the laboratory when working with cell cultures. The PCR method is a suitable and valuable tool for the detection of <em>M.</em><em> s</em><em>alivarium</em> contamination in cell cultures with appropriate and specific primers. This PCR method can be processed in less than one day.
مایکوپلاسما سالیواریوم,آلودگی,کشت سلول
PCR,PCR,Contamination,Mycoplasma salivarium,cell culture
109
118
http://mjms.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-30-1000-2696&slc_lang=fa&sid=30
Vista
Rostamizadeh
ویستا
رستمی زاده
100319475328460067157
100319475328460067157
No
Department of Microbiology, Karaj Branch of Islamic Azad University, Karaj, Iran
گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد کرج،کرج، ایران
Seyed Ali
Pourbakhsh
سید علی
پوربخش
100319475328460067158
100319475328460067158
Yes
Mycoplasma Referance Laboratory, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran
آزمایشگاه رفرانس مایکوپلاسما، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران
Esmaeil
Asli
اسماعیل
اصلی
100319475328460067087
100319475328460067087
No
Mycoplasma Referance Laboratory, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran
آزمایشگاه رفرانس مایکوپلاسما، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران
Azam
Hadadi
اعظم
حدادی
100319475328460067088
100319475328460067088
No
Department of Microbiology, Karaj Branch of Islamic Azad University, Karaj, Iran
گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد کرج،کرج، ایران