Pathobiology Research
Pathobiology Research
mjms
Medical Sciences
http://mjms.modares.ac.ir
1
admin
2538-3000
2538-5887
en
jalali
1388
7
1
gregorian
2009
10
1
11
پاییز و زمستان 87-
online
1
fulltext
fa
کلونینگ و توالییابی ژن
Leishmania homologue of receptors for activated C kinase (LACK) لیشمانیا ماژور سویه استاندارد ایرانی
Cloning and sequencing of L. major leishmania homologue of receptors for activated C kinase (LACK) gene
هدف: لیشمانیوزیس جزء بیماریهای عفونی– انگلی مهم دنیاست که توسط تک یاختههای نسجی خونی داخل سلولی اجباری از جنس لیشمانیا ایجاد میشود. ژن LACK یک پروتئین 36 کیلودالتونی است که در فرمهای پروماستیگوت و آماستیگوت انگل، در گونههای مختلف لیشمانیا به مقدار بالایی وجود دارد. LACK پاسخ ایمنی سریعی علیه انگل ایجاد میکند؛ بنابراین این ژن برای تهیه آنتیژن نوترکیب مناسب بوده و انتخاب خوبی بهعنوان واکسن DNA علیه لیشمانیا ماژور است، این مطالعه با هدف کلون نمودن ژن LACK لیشمانیا ماژور ایران برای تولید پروتئین نوترکیب برای ساخت واکسن انجام شده است.
مواد و روشها: در این تحقیق DNA از سویه استاندارد ایرانی لیشمانیا ماژور (MRHO/IR/75/ER) استخراج و ژن LACK با استفاده از روش PCR تکثیر شد. سپس قطعه 939 جفتبازی تکثیر شده در پلاسمید pTZ57R/T کلون شد. پلاسمید نوترکیب در باکتری اشرشیاکلی سویه TG1 ترانسفورم و توالییابی شد.
نتایج: آنالیز تعیین توالی ژن LACK لیشمانیا ماژور کلون شده در پلاسمید pTZ57R/T مشخص کرد که قطعهای 939 جفتبازی در این پلاسمید کلون شده است و ژن کلون شده، ژن LACK لیشمانیا ماژور است. این سویه ایرانی 89 درصد با سویه موجود در بانک ژنی با کد LmjF28.2740 شباهت دارد. این کلونینگ با روشهای PCR و برش آنزیمی تأیید شد.
نتیجهگیری: نتایج بهدست آمده نشان داد که این ژن با موفقیت تکثیر و کلون شده و از این کلون میتوان کلونهایی در پلاسمید بیانی پروکاریوتی برای تهیه آنتیژن نوترکیب و پلاسمید یوکاریوتی برای تهیه واکسن DNA استفاده کرد. این مطالعه راهی برای پیشرفت تولید پلاسمیدهای نوترکیب برای مطالعات آینده است.
Objective: Leishmaniasis is caused by parasitic protozoa of the genus Leishmania which in the infected host is obligate intracellular parasite. LACK gene is conserved among related Leishmania species. LACK is the immuno-dominant antigen of L.major which is considered as the most promising molecule for a recombinant or DNA vaccine against leishmaniasis.
Materials and Methods: In this study the genomic DNA of an Iranian standard strain of Leishmania major (MRHO/IR/75/ER) was ertracted and the LACK gene was amplilified by PCR. Then the PCR product was cloned into pTZ57R/T cloning vector, The PT-LACK recombinant plasmid was extracted from transformed E.coli bacteria (TG1 strain) and sequenced.
Results: The LACK gene (Accession no LmjF28.2740) of MRHO/IR/75/ER & L. major was amplified using PCR method. LACK gene was cloned into pTZ57R/T coloning vector. Sequence analysis of the cloned LACK gene showed high homology 89% with LmjF28.2740 (LACK gene).
Conclusion: The LACK gene of L.major was cloned in pTZ57R/T vector successfully. Recombinant plasmid was confirmed and could be used for the production of recomiomort antigens is DNA vaccines, for further studies.
کلونینگ,توالییابی,لیشمانیا ماژور
LACK,Cloning,Sequencing,L.major
19
30
http://mjms.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1000-6396&slc_lang=fa&sid=30
Oghol Niaz
Jorjani
اوغلنیاز
جرجانی
100319475328460066167
100319475328460066167
No
of Parasitology, School of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه انگلشناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
Fatemeh
Ghaffarifar
فاطمه
غفاری فر
100319475328460066168
100319475328460066168
Yes
Associated Professor, Department of Parasitilogy, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
دانشیار، گروه انگل‏شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
Zohreh
Sharifi
زهره
شریفی
100319475328460066176
100319475328460066176
No
Iranian Blood Transfusion Organization, Tehran, Iran
سازمان انتقال خون ایران، تهران، ایران
Abdolhossein
Dalimi
عبدالحسین
دلیمیاصل
100319475328460066170
100319475328460066170
No
Department of Parasitology, School of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه انگلشناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
Zahir
Hassan
زهیر محمد
حسن
100319475328460066171
100319475328460066171
No
Department of Immunology, School of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه ایمنی شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران