دوره 23، شماره 1 - ( 1398 )                   جلد 23 شماره 1 صفحات 27-32 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Bahrololoumi Shapour Abadi M, Arashkia A, Mohajel N, Roohvand F, Azadmanesh K. Cloning and Expression of IL-15 Gene in E. coli, Rosetta (DE3) Strain. Pathobiol Res. 2020; 23 (1) :27-32
URL: http://mjms.modares.ac.ir/article-30-34387-fa.html
بحرالعلومی شاپورآبادی مینا، آرش‌کیا آرش، محجل نصیر، روحوند فرزین، آزادمنش کیهان. کلونینگ و بیان ژن اینترلوکین15 در باکتری E. coli سویه Rosetta (DE3). پژوهش‌های آسیب‌شناسی زیستی. 1398; 23 (1) :27-32

URL: http://mjms.modares.ac.ir/article-30-34387-fa.html


1- بخش ویروس‌شناسی مولکولی، انستیتوپاستور ایران، تهران، ایران
2- بخش ویروس‌شناسی مولکولی، انستیتوپاستور ایران، تهران، ایران ، azadmanesh@pasteur.ac.ir
چکیده:   (392 مشاهده)
اینترلوکین۱۵ (IL-۱۵)، سایتوکاینی است که به واسطه فعالیت‌های فیزیولوژیکی آن می‌تواند در درمان‌های ضدسرطان نقش ایفا کند. IL-۱۵ باعث تمایز، تکثیر، فعال‌شدن و بقای سلول‌های کشنده طبیعی می‌شود و بقای لنفوسیت‌های T خاطره‌ای را بهبود می‌بخشد. از آنجایی که راندمان تولید و تخلیص این سایتوکاین عمدتاً پایین است، علی‌رغم پیشرفت‌های اخیر، همچنان بهینه‌کردن شرایط تولید، ارزشمند است. بنابراین در مطالعه حاضر، اقدام به کلون و بیان ژن IL-۱۵ انسانی در باکتری متفاوت با سویه‌های قبلی شد و به جای بیان در باکتری E. coli سویه رایج BL۲۱، از سویه Rosetta (DE۳) استفاده شد که قادر است با استفاده از کدون‌های نادری که در باکتری کمتر مورد استفاده قرار می‌گیرند، بیان ژن‌های یوکاریوتی را بهتر از سویه‌های دیگر انجام دهد، به‌طوری که پروتئین بیان‌شده شباهت بیشتری به پروتئین انسانی داشته باشد. پس از سنتز ژن IL-۱۵، توالی مورد نظر در وکتور بیانی باکتریال pET۲۸a کلون شد و پس از تایید با کلنیPCR، هضم آنزیمی با آنزیم‌های BamHI و XhoI و مشاهده باند ۳۹۱ بازی روی ژل آگارز و تعیین توالی، در باکتری E. coli سویه Rosetta (DE) ترانسفورم شد. القای بیان در جذب نوری ۶/۰ در OD۶۰۰ و در حضور ۱میلی‌مولار ایزوپروپیل- بتا- دی- تیوگالاکتوپیرانوزید (IPTG) انجام شد. مشاهده باند ۱۵کیلودالتونی روی ژل SDS-PAGE و سپس انجام وسترن‌بلات به کمک آنتی‌بادی اختصاصی تجاری علیه IL-۱۵، نشان از درستی فرآیند بیان داشت. راندمان بیان به کمک دانسیتومتری با نرم‌افزار Fiji حدود ۳۷% تخمین زده شد. با توجه به اینکه بیان ژن انسانی IL-۱۵ در سویه باکتریایی E. coli Rosetta (DE۳) انجام شده است، انتظار می‌رود که در مطالعات بعدی، عملکرد مناسبی از خود نشان دهد.
متن کامل [PDF 986 kb]   (78 دریافت)    
نوع مقاله: پژوهشي اصيل | موضوع مقاله: فرآورده های بیولوژیک
دریافت: 1398/4/10 | پذیرش: 1399/3/2 | انتشار: 1399/4/2
* نشانی نویسنده مسئول: تهران. خیابان پاستور. پلاک 69. انستیتو پاستور ایران.

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA

ارسال پیام به نویسنده مسئول