دوره 13، شماره 4 - ( 1389 )                   جلد 13 شماره 4 صفحات 0-0 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Hosseini S, Sabahi F, Modarresi M H, Moazzeni S M, Saberi firoozi M, Ravanshad M, et al . Cloning and evaluation of expression of a novel overlapping region of NS3 gene of Hepatitis C virus by expressing vector. mjms. 2011; 13 (4)
URL: http://mjms.modares.ac.ir/article-30-3723-fa.html
حسینی سید یونس، صباحی فرزانه، مدرسی محمد حسین، مؤذنی سید محمد، صابری فیروزی مهدی، روانشاد مهرداد، و همکاران.. تولید کلون و بررسی بیان توالی همپوشانی از ژن NS3 ویروس هپاتیت C به‏وسیله سازه بیانی DNA. Pathobiology Research. 1389; 13 (4)

URL: http://mjms.modares.ac.ir/article-30-3723-fa.html


1- شیراز، بلوار زند، بیمارستان نمازی، مرکز تحقیقات گوارش و کبد
2- گروه ویروس‏شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران
3- گروه ژنتیک پزشکی ، دانشگاه علوم پزشکی تهران
4- گروه ایمنی‌شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
5- مرکز تحقیقات گوارش و کبد
6- گروه ویروس شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
7- مرکز تحقیقات گوارش و کبد شیراز
8- گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران
چکیده:   (5936 مشاهده)
هدف: هدف تولید یک سازه بیان کننده توالی یک ناحیه همپوشان از ژن NS3 از ویروس ایزوله ایرانی است. مواد و روش‏ها: ابتدا بخش میانی ژن NS3 با روش Nested-RT-PCR و با استفاده از سرم بیمار مبتلا به ژنوتیپ 1a ویروس هپاتیت C تکثیر شد. بعد از کلون آن درون ناقل کلونینگ TA و غربالگری کلون‏ها براساس روش سفید- آبی و Colony-PCR این کلون‏های منتخب با روش تعیین توالی و هضم آنزیمی با BglII ارزیابی شد. توالی جدید با استفاده از نرم‏افزار با توالی‏های دیگر مرجع مقایسه و درخت تکاملی ترسیم شد. بخش میانی ژن NS3 تأیید شده و سپس به درون سازه بیانی، کلون شد و کلون‏های مناسب با استفاده از دو نوع Colony-PCR شناسایی شد. ارزیابی نهایی بیان ژن با مشاهده GFP توسط میکروسکوپ فلورسانس، روش RT-PCR و وسترن بلات روی سلول‏های ترانسفکت شده با سازه بیانی تأیید شد. نتایج: توالی میانی NS3 از روی سرم بیمار تکثیر و نتایج توالی‏یابی و مقایسه ژنی نشان داد که این توالی به توالی‏های مرجع شباهت داشته و در شاخه ژنوتیپ 1 ویروس هپاتیت C قرار دارد. با روش Colony-PCR وجود و نیز جهت ژن درون پلاسمید بیانی تأیید شد. مشاهده GFP توسط میکروسکوپ فلورسانس، روش RT-PCR و وسترن بلات به‏ترتیب نمایانگر انتقال موفق سازه، بیان ژن و نیز تولید پروتئین در سلول‏های 293 بود. نتیجه‏گیری: سازه بیانی حاوی بخش میانی ژن NS3 که بایستی فاقد فعالیت پروتئازی باشد، نسبت به طول کامل ژن NS3 می‏تواند در القای بهتر ایمنی توسط سلول‏های عرضه کننده آنتی ژنی در موارد واکسن ویروس هپاتیت C مفیدتر واقع شود.
واژه‌های کلیدی: ویروس هپاتیت C، سازه DNA، ژن NS3
متن کامل [PDF 996 kb]   (5434 دریافت)    

دریافت: 1389/8/19 | پذیرش: 1389/9/29
* نشانی نویسنده مسئول: تهران

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA